Q 提取的外泌體RNA中有DNA污染？查看詳情
A外泌體裂解分相時(shí)，RNA在上層水相中，而DNA在中間層，轉(zhuǎn)移上層水相時(shí)，要注意不要吸到中間層，所以要保留部分水相，不要全吸取。
Q 提取的外泌體RNA下游應(yīng)用時(shí)，如RT-PCR不是很好？查看詳情
A洗脫的外泌體RNA中含有乙醇和/或較多鹽離子污染，會(huì)抑制PCR反應(yīng)，所以，在最后洗滌時(shí)，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的洗滌液。
Q 如何定量提取的外泌體RNA？查看詳情
A外泌體RNA含量較少（1-100 pg/μL ），所以，用常規(guī)定量RNA方法是很難的，并且不同樣本外泌體含量不同，含有的RNA量也不同，一般定量RNA方法有：
Bioanalyzer RNA Quantification kits；NanoDrop 2000；Quant-iT? RiboGreen? RNA Assay Kit；qPCR Standard Curve。
Q 為什么提取的外泌體RNA A260/280低于2.0？查看詳情
A大部分外泌體RNA是小RNA，且濃度很低，RNA的A260/280比值會(huì)隨RNA濃度降低而降低，正常A260/280比值在1.0-1.6之間，低的A260/280比值不會(huì)影響下游應(yīng)用。
Q 如果樣本的粘度過(guò)大該如何處理？查看詳情
A如果樣本粘度過(guò)大時(shí)，可以用1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋，將其混勻后再使用相應(yīng)的外泌體提取試劑進(jìn)行外泌體提取。
Q 細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入外泌體沉淀試劑并離心后，沒(méi)有出現(xiàn)沉淀，是哪里出的問(wèn)題？查看詳情
A由于某些細(xì)胞中外泌體含量比較低，所以加了外泌體沉淀試劑之后肉眼可能無(wú)法觀察到沉淀，在重懸時(shí)使用 PBS 液朝離心管離心外側(cè)的內(nèi)壁反復(fù)吹打即可（避免劇烈吹打）。提取后的外泌體先進(jìn)行BCA 蛋白定量檢測(cè)，再?zèng)Q定是否進(jìn)行后繼實(shí)驗(yàn)。
